试剂产品

¢ 产品简介：

DiR碘化物是一类长链的亲脂性荧光染料，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构，DiR呈深红色荧光，在水中荧光强度很弱，与细胞膜结合或者与亲脂性生物分子结合时，其荧光强度显著增强。其具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命，应用于细胞，染料在细胞质膜内横向扩散，导致整个细胞在其浓度下均匀染色。DiR 自身荧光背景较低，红外荧光可以穿透细胞和组织，可以在活体成像中用来示踪。

¢ 产品基本参数：

中文名称：BLT DiR碘化物，DiR'[DiIC18(7)]

分子量：~1013.4

形态：固体粉末

纯度：95+%

溶剂：DMSO/DMF/EtOH

激发波长：748 nm

发射波长：780 nm

¢ 使用方法：

1. 染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。储存液分装储存在-20 ℃或-80 ℃，避免反复冻融。

（2）工作液制备：根据染色体系用合适的缓冲液（如：无血清培养基，PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。最佳染色的工作液浓度与细胞系和实验体系有关，可多次尝试染色实验优化，且工作液现配现用。

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积（300 μL）的染色工作液重悬细胞，染色细胞浓度可尝试1×10⁶/mL。

（2）孵育细胞：在室温或37 ℃环境避光孵育细胞，不同的细胞最佳培养时间不同。建议首次孵育细胞20 min，之后可优化孵育时间，以得到均一的标记结果。

（3）清洗多余染料：孵育结束，以1000～1500 rpm离心细胞5 min，去除上清液，用缓冲液重复清洗操作三次，注意缓慢操作。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入适当体积（300 μL）的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）以相同悬浮细胞的孵育条件进行孵育，及孵育时间优化。

（5）吸干染料工作液，用培养液或缓冲液清洗盖玻片3次以上。

注：本方案仅供参考，具体实验条件请研究人员依据自身项目进行优化。

4. 外泌体的染色

（1）用PBS稀释存储液，配制浓度为 50-100 μM 的染料工作液，建议加入外泌体悬浮液体积的1/10体积的染料工作液（如1mL内含100 μL工作液）。

（2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 37 °C避光孵育 30 min。

注：染色条件和外泌体浓度有关，可多次尝试染色浓度和时间实验优化。

（3）向孵育后的外泌体-染料复合物中加入10 mL的1X PBS混匀，，按照外泌体提取方法（离心或其他）再次提取外泌体，以去除多余染料，重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。

5. 检测条件

对于使用BLT小动物活体成像系列，可选择Ex/Em：745/820 nm，进行检测。

附表：

n 应用场景：

图1. 通过将DiR负载到叶酸二十糊精聚己内酯(DPFtIP)和顺铂二十糊精聚己酸内酯(DPtIP)的疏水结构域中,(A)用DPtIP、DPtIP和DPFtIP与叶酸孵育的4T1细胞的CLSM图像 (B)小鼠分别静脉注射游离DiR、DPtIP和DPFtIP后，在预定时间点的小鼠体内荧光图像

¢ 注意事项:

1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

2．最佳染色的工作液浓度与细胞系和实验体系有关，可多次尝试染色实验优化，且工作液现配现用；

3．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！